? ? ? ? ?pcr實驗室污染后需要如何處理呢,如何才能更好、更全的避免這樣的事情發(fā)生呢?回答這樣的問題需要專業(yè)的pcr實驗室建設(shè)公司用專業(yè)的行業(yè)經(jīng)驗我們指導以及一些備用的方法,針對這一情況,深圳賽諾給我們兩點關(guān)于pcr實驗室污染的處理方法以及pcr實驗室操作需要注意的事項的總結(jié):
解決PCR實驗室檢測被污染的方法??
? ? ? ? ?第一:修飾:標記遺傳物質(zhì),阻止聚合酶與核酸的結(jié)合,從而抑制DNA擴散(效果相對較好)。
? ? ? ? ?第二:酒精擦拭:將核酸沉淀,擦拭后保證污染表面污染得到一定程度的緩解(簡單、方便、成本低)。??
? ? ? ? ?第三:紫外照射:PCR產(chǎn)物中嘧啶堿基會形成二聚體,延伸終止(方便、范圍廣、成本低)。
? ? ? ? ?第四:酶解酶可將長鏈的核酸分子降解成小片段(速度快、效果效果相對相對較好)。??
? ? ? ? ?第五:高壓變性:高壓可以將核酸降解成20-30bp的小片段(徹底、成本低)。??
PCR實驗操作注意事項??
? ? ? ? ?盡管擴增序列的殘留污染大部分是假陽性反應(yīng)的原因,樣品間的交叉污染也是原因之一。因此,不僅要在進行擴增反應(yīng)是謹慎認真,在樣品的收集、抽提和擴增的所有環(huán)節(jié)都應(yīng)該注意:
? ? ? ? ?1、盡可能用可替換或可高壓處理的加樣器,由于加樣器最容易受產(chǎn)物氣溶膠或標本DNA的污染,最好使用可替換或高壓處理的加樣器。如沒有這種特殊的加樣器,至少PCR操作過程中加樣器應(yīng)該專用,不能交叉使用,尤其是PCR產(chǎn)物分析所用加樣器不能拿到其它兩個區(qū);
? ? ? ? ?2、避免反應(yīng)液飛濺,打開反應(yīng)管時為避免此種情況,開蓋前稍離心收集液體于管底。若不小心濺到手套或桌面上,應(yīng)立刻更換手套并用稀酸擦拭桌面;??
? ? ? ? ?3、戴一次性手套,若不小心濺上反應(yīng)液,立即更換手套;??
? ? ? ? ?4、最后加入反應(yīng)模板,加入后蓋緊反應(yīng)管;
? ? ? ? ?5、使用一次性吸頭,嚴禁與PCR產(chǎn)物分析室的吸頭混用,吸頭不要長時間暴露于空氣中,避免氣溶膠的污染;
? ? ? ? ?6、操作多份樣品時,制備反應(yīng)混合液,先將dNTP、緩沖液、引物和酶混合好,然后分裝,這樣即可以減少操作,避免污染,又可以增加反應(yīng)的精確度;
? ? ? ? ?7、操作時設(shè)立陰陽性對照和空白對照,即可驗證PCR反應(yīng)的可靠性,又可以協(xié)助判斷擴增系統(tǒng)的可信性;??
? ? ? ? ?8、重復實驗,驗證結(jié)果,慎下結(jié)論。??